操作指南

Operation Guide

冻干菌种复苏操作指南

第一步：产品说明

第一步：产品说明

冻干菌种为微生物菌种的休眠形式，经真空冷冻干燥技术处理，处于低代谢状态，需通过复苏操作恢复其活性。

第二步：表面消毒与预处理

第二步：表面消毒与预处理

使用75%乙醇棉球对冻干管表面进行消毒，随后将冻干管顶端置于酒精灯外焰处均匀加热，以确保管壁温度均匀上升。

第三步：破裂冻干管

第三步：破裂冻干管

在加热部位滴加2~3滴无菌水，利用热胀冷缩原理使管壁产生裂痕，随后使用镊子或其他适宜工具轻敲破裂处，使冻干管开口。

第四步：溶解冻干菌粉

第四步：溶解冻干菌粉

使用无菌吸管吸取约0.2-0.5 mL液体培养基（根据《菌种说明书》中固体培养基配方去除琼脂成分制备）注入冻干管内，充分溶解冻干菌粉，确保菌粉完全分散于培养基中。

第五步：转移菌悬液

第五步：转移菌悬液

将溶解后的菌悬液转移至含有4~5 mL液体培养基的试管中，充分混匀。如有需要，可将残留在吸管中的1~2滴菌悬液转接至固体培养基表面。

 

第六步：培养

第六步：培养

将接种后的培养物置于推荐的培养条件下（包括营养成分、温度、湿度及气体环境）进行培养，直至菌落生长。

注意事项

• 无菌操作：所有操作应在无菌操作台内进行，避免污染。
• 接种量：接种量不宜过多，以免影响菌落的形成和分布。
• 培养时间：根据菌株的生长特性，适当调整培养时间。
• 温度控制：控制培养温度，避免过高过低影响菌株生长。
• 记录结果：及时记录菌落形态、培养条件和实验结果。

菌株培养物和冷冻保存管复苏操作指南

一、菌株培养物操作步骤

第一步：操作环境准备

第一步：操作环境准备

在无菌操作台内，点燃酒精灯，确保操作区域无菌。操作需佩戴无菌手套，保持操作台面整洁，避免交叉污染。

第二步：接种工具灭菌

第二步：接种工具灭菌

将接种环在酒精灯火焰上灼烧灭菌，直至接种环完全变红，随后在空气中冷却至适宜温度，避免高温对接种菌体造成损伤。

第三步：接种与划线

第三步：接种与划线

使用灭菌后的接种环，挑取少量菌体，划线接种至琼脂培养基上。划线时应确保菌体分布均匀，以便形成清晰的菌落。

 

第四步：培养

第四步：培养

将接种后的培养物置于预设的培养条件（包括营养成分、温度、湿度及气体环境）中进行培养，直至菌落生长。培养时间根据菌种特性而定，通常为数天至数周不等。

第五步：观察与记录

第五步：观察与记录

定期观察菌落的生长情况，记录菌落的形态、大小、颜色等特征。如发现异常生长或污染迹象，应及时分析原因并采取相应措施。

二、冷冻保存管复苏操作步骤

第一步：准备培养基

第一步：准备培养基

根据《菌种说明书》的要求，准备好推荐的菌种培养基。

第二步：融化冻存管

第二步：融化冻存管

将冻存管下半部浸入37℃温水中，轻轻摇动，使冷冻状态的菌种悬液迅速融化。若收到的冻存管中菌种悬液已处于融化状态，则可以直接进行转接培养。

第三步：表面消毒

第三步：表面消毒

使用75%乙醇棉球对冻存管表面进行消毒处理，确保表面无污染。

第四步：转接菌悬液

第四步：转接菌悬液

在生物安全柜内打开冻存管瓶盖，使用无菌吸管吸取菌悬液，均匀涂布于2支试管斜面或平板上。

第五步：培养

第五步：培养

将试管斜面或平板置于推荐的培养条件下静置培养。对于生长缓慢的菌种，应延长培养时间至正常培养时间的双倍时长，甚至可达2周或更长时间。

注意事项

菌种经过冷冻保藏后处于休眠状态，需通过2~3代转接培养恢复其活力。大部分菌种在复苏后数天内即可生长，但部分菌种首次复苏时可能存在较长的延迟期。对于此类菌种，应将培养时间延长至正常培养时间的双倍时长，甚至可达2周或更长时间。