| 特征特性 |
谷胱甘肽巯基转移酶(GSTs)是一种普遍存在的对细胞有解毒作用的超家族蛋白酶,其中拟南芥来源的Zeta家族(AtGSTZ,Locus tag:AT2G02390)对饮用水中的强致癌物质二氯乙酸(DCA)具有高效的降解作用[Chen D F et al(2003): J. Biosci. Bioeng. 95: 594~600]。Ser73是AtGSTZ底物GSH结合域(G-site)。通过点饱和突变技术对该位点进行了点饱和突变,所得突变子S73N(AAT)位点变化为S73(TCT)→N73(AAT),该突变酶DCA-DC活性为0.059±0.000 U/mg,为野生酶的0.02%[Sudan Tao et al l(2008): Journal of Genetics and Genomics. In press]。点饱和突变文库构建所用载体为Novagen公司的pET21b(+),所用宿主菌为NOVAGEN公司的E. coli BL21(DE3)。BL21(DE3)来源于大肠杆菌B菌株,革兰氏阴性杆菌,粗短,大小为1.1~1.5 µm ×2.0~6.0 µm,基因型为F- ompT hsdSB(rB- mB+) gal dcm (DE3)。含有突变质粒的BL21(DE3)具氯霉素、氨苄青霉素抗性。 |